AbA非常適合用作陽(yáng)性克隆子篩選用的藥物選擇性標(biāo)記。AbA抗性也是酵母單/雙雜交研究中理想的報(bào)告子。本品為溶于甲醇的AbA溶液，濃度為1 mg/ml。具體的工作濃度取決于宿主細(xì)胞的敏感度(見(jiàn)表1. AbA對(duì)各種酵母菌的低抑菌濃度(MIC))。
金擔(dān)子素A的操作步驟(抗AbA的酵母轉(zhuǎn)化系統(tǒng))
1)加入0.5 ml過(guò)夜培養(yǎng)的酵母到50 ml YPD培養(yǎng)基中(配方：1L液體培養(yǎng)基含有10g yeast extract，20g polypeptone， 20g D-glucose;固體培養(yǎng)基另外加入2%瓊脂;)。
2)30℃培養(yǎng)約6小時(shí)，測(cè)定OD660為1～2。使用二倍體時(shí)，測(cè)定OD660為2～4。
3)1,000×g離心5分鐘。
4)用10 ml Solution A(配方：100 mM Lithium acetate，10 mM Tris-HCl pH 7.5，1 mM EDTA)懸浮沉淀，1,000×g離心5分鐘。
5)用Solution A重懸沉淀，直到OD660為150。
6)在管內(nèi)分取100 µl細(xì)胞懸浮液，30℃培養(yǎng)1小時(shí)。
7)加入5 µg載體(環(huán)狀或線(xiàn)性DNA)和150 µg Carrier DNA，100℃加熱10分鐘，迅速冷卻。
注：pAUR101需使用線(xiàn)性DNA進(jìn)行轉(zhuǎn)化。使用環(huán)狀DNA會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率甚至轉(zhuǎn)化不成功。pAUR112和pAUR123需使用完整的質(zhì)粒DNA進(jìn)行轉(zhuǎn)化。
8)加入850 µl Solution B(配方：取40 g Polyethylene Glycol 4000溶于100 ml Solution A充分溶解，需要現(xiàn)用現(xiàn)配)，輕輕混勻。
9)30℃培養(yǎng)30分鐘后，42℃培養(yǎng)15分鐘。
10)室溫放置10分鐘。
11)5,000 rpm離心1分鐘，用5 ml YPD培養(yǎng)基懸浮沉淀。
12)30℃培養(yǎng)6小時(shí)~過(guò)夜。
13)5,000~10,000 rpm離心，用1-10 ml 0.9% NaCl懸浮沉淀。
14)在YPD選擇培養(yǎng)基平板(含有一定濃度的AbA，依菌株類(lèi)型而定)上接種100 µl細(xì)胞懸液。30℃培養(yǎng)3-4天后轉(zhuǎn)化完成。
15)挑取陽(yáng)性轉(zhuǎn)化子，和/或測(cè)定轉(zhuǎn)化效率(以每微克質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)化的菌落數(shù)來(lái)表示)。